A transfeção química é uma técnica pilar na biologia molecular, permitindo a introdução de plasmídeos de DNA para a expressão gênica em células de mamíferos. Na Biosystems, consolidada no mercado de instrumentação desde 1990, identificamos que o maior desafio técnico não é apenas realizar o procedimento, mas quantificar a Eficiência de Transfeção (TE) de forma estatisticamente válida, especialmente ao escalar de microplacas para frascos de cultura de grande formato, como os de 75 cm² (T75).
A Física do Escalonamento: Por que Automatizar?
A determinação manual da eficiência de transfeção via microscopia convencional é inerentemente subjetiva e limitada a poucos campos de visão. Ao utilizar frascos T75, a amostragem torna-se um gargalo crítico. Diferente de um microscópio invertido comum, o sistema automatizado Lionheart FX utiliza uma óptica de amplo campo de visão (WFOV) e um design de platina aberta que acomoda diversos recipientes, permitindo o escaneamento de grandes áreas em minutos.
[Image showing the automated scanning of a T75 flask with a matrix of Regions of Interest (ROIs) for transfection efficiency analysis]Otimização do Protocolo: DNA e Tempo de Incubação
Para maximizar a TE, é necessário equilibrar a quantidade de plasmídeo e o tempo de transfeção. O uso da tecnologia de Microscopia Aumentada da Agilent BioTek permite realizar ensaios de otimização com máxima precisão:
- Análise Multi-ROI: Captura de uma matriz de imagens (ex: 6x9) dentro de um único frasco, garantindo que o resultado represente a população celular total e não apenas um evento isolado.
- Detecção de Repórteres Fluorescentes: Uso de GFP ou RFP para identificar células transfectadas, correlacionando-as com a contagem total obtida via campo brilhante de alto contraste.
- Reprodutibilidade: A movimentação rápida da platina e o foco automático eliminam a variabilidade comum na contagem manual de células.
Inteligência de Dados com Software Gen5
O processamento dos dados é o diferencial competitivo da linha Lionheart. O software Gen5 aplica máscaras de análise celular que calculam automaticamente a razão entre células positivas para o repórter e o total de células identificadas. Este nível de automação é essencial para ensaios de gene repórter, onde a normalização dos dados define a validade da descoberta científica.
Conclusão e Suporte Técnico
A transição para a quantificação automatizada de transfeção assegura que protocolos de modificação genômica sejam robustos e prontos para aplicações de downstream. Na Biosystems, provemos a consultoria técnica necessária para configurar seu fluxo de trabalho, desde o unboxing do sistema até a geração de relatórios estatísticos complexos.
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A Biosystems fornece a tecnologia Lionheart FX para elevar o rigor estatístico da sua pesquisa genômica.
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