Na biologia celular e no desenvolvimento farmacêutico, a medição da confluência celular é um método direto e essencial para quantificar o crescimento e a saúde de uma população de células. Tradicionalmente, este processo dependia da interpretação subjetiva de um operador ou do uso de corantes fluorescentes que podem interferir na fisiologia celular. A Biosystems, atuando na vanguarda da instrumentação desde 1990, destaca a tecnologia de campo brilhante de alto contraste como a solução definitiva para análises label-free (sem marcação).
O Desafio da Visualização sem Corantes
Células em cultura são, em sua maioria, transparentes, apresentando baixo contraste em relação ao fundo quando observadas em microscopia de campo brilhante convencional. Para superar essa limitação sem recorrer a técnicas invasivas, a engenharia da Agilent BioTek utiliza um deslocamento controlado do foco (offset) para criar um halo brilhante ao redor de cada célula. Este efeito gera imagens de alto contraste, permitindo que o software identifique com precisão a área ocupada pela biomassa.
Vantagens da Tecnologia Label-Free
A adoção de métodos label-free para monitorar a proliferação celular cinética oferece benefícios técnicos cruciais:
- Preservação da Viabilidade: Elimina o estresse químico e a fototoxicidade associada aos corantes fluorescentes, permitindo estudos de longa duração.
- Normalização de Dados: Facilita a quantificação em microplacas ao fornecer uma métrica de confluência para normalizar outros sinais bioquímicos.
- Redução de Custos: Menor consumo de reagentes e tempo de preparação de amostras.
Automação com Gen5 e Hit-Picking
O processamento das imagens de alto contraste é gerenciado pelo software Gen5, que aplica máscaras celulares dinâmicas. Através da função de threshold (limiar), o sistema diferencia automaticamente as células do fundo do poço, calculando o percentual de confluência instantaneamente. Em sistemas avançados como o Cytation 5, é possível configurar critérios de Hit-Picking, onde o equipamento decide realizar capturas de fluorescência apenas nos poços que atingiram um nível específico de confluência.
Aplicações em Cinética de Células Vivas
Esta técnica é indispensável para laboratórios que realizam microscopia automatizada de células vivas. Ao integrar o leitor com o controle de CO2 e O2, o pesquisador pode monitorar o tempo de duplicação celular e a resposta a fármacos por vários dias, capturando a dinâmica real do crescimento sem intervenção manual.
Otimize sua Análise de Proliferação
A Biosystems fornece o ecossistema completo da Agilent BioTek para transformar suas imagens em dados estatísticos precisos.
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