Na microscopia de alta resolução, a capacidade de distinguir dois pontos adjacentes como entidades separadas é definida pela resolução óptica. Quando o objetivo é visualizar estruturas intracelulares com menos de 500 nanômetros, a microscopia a seco atinge seu limite físico. Na Biosystems, consolidada no mercado de instrumentação desde 1990, destacamos que o uso correto de objetivas de imersão em óleo é o que permite ao pesquisador extrair o potencial máximo de sistemas como o Lionheart FX.
A Física do Índice de Refração e a Abertura Numérica
O segredo da imersão reside na eliminação da interface de ar entre a lamínula e a lente frontal da objetiva. O ar possui um índice de refração de 1.0, o que causa o desvio e a perda de raios de luz oblíquos. Ao utilizar um óleo de imersão com índice de refração de 1.515 — opticamente idêntico ao vidro — cria-se uma coluna líquida contínua que aumenta a Abertura Numérica (NA) da lente.
Como detalhado em nosso Guia Definitivo de Objetivas, quanto maior a NA, maior a capacidade de coleta de fótons. Isso é especialmente crítico em Microscopia de Fluorescência, onde sinais débeis exigem a máxima eficiência óptica para evitar tempos de exposição prolongados e a consequente fototoxicidade.
Boas Práticas Operacionais no Lionheart FX
O Lionheart FX da Agilent BioTek é compatível com objetivas Olympus de 60x e 100x de alta abertura numérica. Para garantir imagens de alta fidelidade e proteger o hardware, a Biosystems recomenda seguir estas diretrizes:
- Fixação da Lâmina: Devido à alta tensão superficial do óleo, a lâmina deve estar perfeitamente presa ao suporte. Movimentos laterais durante o foco podem deslocar a amostra se as travas não estiverem acionadas.
- Gerenciamento de Luz: Objetivas de alta NA coletam mais luz, mas também atuam como fonte de iluminação mais intensa na fluorescência. Reduza a intensidade do LED durante o ajuste de foco para preservar o sinal dos fluorocromos.
- Foco Gradual: Utilize sempre as setas de foco fino ou o joystick de precisão. O contato excessivo entre a lente frontal e a lamínula pode causar danos permanentes à óptica.
Manutenção e Limpeza Crítica
Resíduos de óleo seco são os maiores degradadores da qualidade da imagem a longo prazo. A limpeza deve ser executada imediatamente após o uso, utilizando lenços ópticos não abrasivos. Caso o óleo tenha se acumulado, utilize etanol puro com extrema cautela. Esta manutenção é tão vital quanto o ajuste do condensador para iluminação de Köhler, garantindo que o caminho óptico permaneça livre de aberrações.
Integração com Imageamento Celular
A transição para a imersão em óleo transforma o Lionheart FX em uma ferramenta poderosa para a Microscopia Automatizada de Alta Resolução. Através do software Gen5, o sistema realiza capturas multidimensionais que revelam a dinâmica de organelas em culturas de células vivas, mantendo a estabilidade térmica e ambiental necessária para experimentos de longa duração.
Eleve a Resolução da sua Pesquisa
A Biosystems fornece objetivas de imersão originais e suporte técnico especializado para toda a linha Agilent BioTek.
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