O Cálcio (Ca2+) é um dos mensageiros secundários mais onipresentes e críticos na biologia celular. Sua dinâmica intracelular governa processos vitais que vão da neurotransmissão rápida à contração miocárdica e regulação enzimática. No contexto do High-Throughput Screening (HTS), os Ensaios FLIPR (Fluorescence Imaging Plate Reader) tornaram-se o padrão ouro para monitorar essas variações cinéticas em tempo real.
A Física da Detecção de Ca2+ em Tempo Real
Diferente de ensaios de ponto final (endpoint), o monitoramento do fluxo de cálcio exige a captura de eventos que ocorrem em milissegundos. A técnica utiliza indicadores fluorescentes — como o Fluo-4 ou Fura-2 — que aumentam drasticamente sua intensidade de emissão ao se ligarem ao Ca2+ livre no citosol.
O diferencial técnico desses ensaios reside na integração entre óptica de alta sensibilidade e sistemas de injeção automática. Para capturar o "pico" de liberação de cálcio, o equipamento deve ser capaz de injetar o agonista (estímulo) e iniciar a leitura de fluorescência de forma simultânea, sem retirar a placa do compartimento de detecção.
Vantagens da Cinética Automatizada
A utilização de leitoras de microplacas avançadas para ensaios tipo FLIPR oferece benefícios cruciais para a reprodutibilidade científica:
- Análise de Agonistas e Antagonistas: Permite caracterizar a eficácia e a potência de novos fármacos através de curvas de dose-resposta cinéticas.
- Monitoramento de Canais Iônicos e GPCRs: Essencial para o estudo de receptores acoplados à proteína G, onde o efluxo de Ca2+ é o principal sinalizador de ativação.
- Alta Resolução Temporal: Captura centenas de pontos de dados por segundo, permitindo visualizar a fase de subida rápida e o declínio (recaptação) do cálcio.
Aplicações em Drug Discovery e Fisiologia
Desde a triagem de bibliotecas de compostos até o estudo da sinalização neuronal, a capacidade de "enxergar" o fluxo iônico in situ é insubstituível. Em cardiologia, por exemplo, esses ensaios são vitais para avaliar o impacto de substâncias na homeostase do cálcio em cardiomiócitos, prevenindo riscos de arritmias em fases precoces do desenvolvimento de fármacos.
Liderança em Instrumentação BioTek
A Biosystems, em parceria de décadas com a Agilent BioTek, oferece leitoras multimodais equipadas com módulos de injeção de fluidos de precisão. Equipamentos como a linha Synergy e Cytation permitem realizar ensaios de fluxo de cálcio com a mesma performance de sistemas dedicados, mas com a versatilidade de atender a inúmeras outras demandas analíticas do laboratório.